Diferenças entre edições de "Engenharia genética/Amplificação por PCR do gene GFP de Aequorea victoria"

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== Preparação das soluções para PCR ==
* Colocar os tubos em gelo;
 
[[Imagem:Serial Dilution (to PCR).jpg|thumb|centre|900px|Preparação de soluções de DNA polimerase com diferentes concentrações, através da técnica de diluições seriais, para amplificação em PCR. Os factoresfatores de diluição correspondentes a cada solução estão representados nos rótulos dos respectivos eppendorfs. Pipetaram-se 100μL da solução inicial (1x) para o 1º eppendorf e adicionaram-se 900μL de Tampão de Diluição. Agitar a solução. Desta solução (10x) pipetaram-se 200μL para o 2º eppendorf e adicionaram-se 800μL de Tampão de Diluição. E assim sucessivamente, como descrito na figura, sempre de modo a perfazer 1mL de volume final no eppendorf. De todos esses eppendorfs retiraram-se 20μL aos quais se adicionou igual volume de Mastermix. Agitar as soluções. Inserir no termociclador, para realizar o PCR.]]
 
* Depois de agitadas no ''vortex'', as misturas são sujeitas a PCR de acordo com as condições especificadas na
* Aplicar as amostras num [http://en.wikipedia.org/wiki/Agarose_gel gel de agarose] 0,8%;
 
* O instrutor efectuaefetua a electroforeseeletroforese com as amostras correspondentes aos produtos de PCR de referência;
 
* Correr o gel, durante 20 minutos, a 220 volts;
* Fotografar o gel.
 
[[Imagem:Gel electrophoresis apparatus.JPG|thumb|left|250px|Aparelho de ElectroforeseEletroforese em gel. O gel de agarose é colocado nesta caixa com solução tampão e a corrente eléctrica é-lhe aplicada. O terminal negativo está no topo (fio preto), então o DNA migra em direcção ao observador.]]
 
[[Imagem:Agarose-Gelelektrophorese.png|thumb|right|400px|Representação esquemática do processo de electroforeseeletroforese, detalhando as sucessivas etapas. (1) Gel de agarose com três poços. (2) InjecçãoInjeção da solução padrão de DNA marcadora de pesos moleculares, no primeiro poço. (3) Após o padrão estar injectadoinjetado, injectaminjetam-se as amostras no segundo e terceiro poços. (4) Aplica-se uma corrente eléctricaelétrica que provoca a migração do DNA para o pólo positivo, devido à carga negativa conferida pelo esqueleto fosfatado. (5) As cadeias de DNA pequenas migram mais rapidamente, por outro lado, as maiores migram mais lentamente através do gel; normalmente, durante este processo, o DNA não é visível, por isso adiciona-se ao DNA um corante ou marcador para evitar que o DNA migre para fora do gel. (6) Adicionar o corante ou marcador também ao padrão de DNA.]]
 
== ActividadesAtividades propostas ==
 
* Comparar o rendimento do PCR obtido com o da Taq polimerase comercial.
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