Engenharia genética/Os vetores do sistema pET: diferenças entre revisões
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|[[Engenharia Genética:As DNA Polimerases Taq e Pfu|As DNA Polimerases Taq e Pfu]]|
[[Engenharia Genética:Clonagem por PCR|Clonagem por PCR]]
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Para amplificar as DNA polimerases Taq e Pfu, utilizaram-se os vectores pET.
O sistema pET da Novagen tem sido reconhecido como uma das mais poderosas abordagens disponíveis para produção de proteínas recombinantes. Existe uma vasta variedade de vectores pET, todos derivados do pBR322 e com base num sistema comandado pelo promotor T7 (do bacteriófago T7) para dirigir a expressão de genes-alvo.
O hospedeiro mais comummente utilizado é o BL21, o qual tem a vantagem de ser deficiente em ambas as proteases ''lon''
Recentemente, a Novagen introduziu dois derivados do BL21 para finalidades especiais, dos quais salientamos a série B834 que é um auxotrófico deficiente em metionina e, então, permite elevada actividade específica marcando as proteínas-alvo com 35S-metionina ou selenometionina. Como estirpe hospedeira do Sistema pET utilizámos ''Escherichia coli'' BL21(DE3) pET-Pfu e pET-Taq.
=====Descrição da Estirpe Hospedeira do Sistema pET=====
<center>
{| border Estirpe
| Estirpe|| Derivação|| Características Especiais|| Resistência a Antibióticos|| Competência das Células
|-
| BL21(DE3)|| B834|| Faltam as proteases ''lon'' e ''ompT''|| Nenhuma|| Sim
|}
</center>
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* '''Poderoso''': níveis de expressão mais elevados, maior controlo sobre a expressão basal; adequação da escolha de vectores e estirpes hospedeiras ao controlo dos níveis de expressão basal e induzido.
* '''Versátil''': escolha das tags de fusão em N-terminal e C-terminal para detecção, purificação e localização; Existência de multiple cloning sites expandidas nas três reading frames; Origem de replicação f1 para mutagénese e sequenciação.
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