Engenharia genética/Rendimento do PCR: diferenças entre revisões

Da solução de Taq Comercial (c = 1 U/μL) pipetámos 5 μL (5 U) e diluímos em 100 μL (factor diluição = 20x).

A partir desta solução de Taq pipetámos os volumes indicados nas preparações A a E (tabela 2), aos quais adicionámos diferentes volumes de tampão, perfazendo o volume de 20 μL para todas as preparações. Deste modo, obteve-se um gradiente de concentrações de Taq decrescente de A para E. A quantidade de Taq (U) presente em cada preparação, corresponde aos valores indicados, calculados de acordo com a seguinte relação: (exemplificando para a preparação B)

De seguida, adicionou-se igual volume de ''Mastermix'' a todas as preparações; como o volume das mesmas duplicou para 40 μL, a concentração de Taq presente em cada preparação corresponde à razão entre a Quantidade (U) e o Volume (40 μL).

O volume de Mastermix adicionado é um parâmetro constante para as diferentes preparações, de modo a que se possam apurar conclusões relativamente à variável em estudo, ou seja, a concentração de Taq DNA polimerase e sua capacidade em realizar efectivamente a ''Polimerase Chain Reaction'' obtendo-se, consequentemente, produtos de PCR detectáveis no gel da electroforese.

Como representado na tabela 2 e demonstrado na figura 1abaixo, detectou-se a presença de produtos de PCR nas preparações A e B.

Tabela 2 –===== Preparação e características das soluções (A a E) de diferentes concentrações de Taq DNA polimerase comercial para aplicação no gel electroforético. =====