Diferenças entre edições de "Engenharia genética/Os vetores do sistema pET"

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[[Engenharia Genética:Clonagem por PCR|Clonagem por PCR]]
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== Considerações iniciais ==
 
Para amplificar as DNA polimerases Taq e Pfu, utilizaram-se os vectores pET.
 
O sistema pET da [http://www.emdbiosciences.com/html/NVG/home.html Novagen] tem sido reconhecido como uma das mais poderosas abordagens disponíveis para produção de [http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_recombinant_proteins proteínas recombinantes. Existe uma vasta variedade de vectores pET, todos derivados do pBR322 e com base num sistema comandado pelo promotor T7 (do bacteriófago T7) para dirigir a expressão de genes-alvo].
 
[[Imagem:T7 RNA polymerase at work.png|thumb|right|470px|Representação esquemática da T7 RNA Polimerase (azul) produzindo mRNA (verde) a partir de um ''template'' de DNA em dupla cadeia (laranja). Baseado em [http://www.rcsb.org/pdb/explore/explore.do?structureId=1MSW PDB ID 1MSW]]]
Considerando que a RNA polimerase da ''E. coli'' não reconhece o promotor T7, supõe-se que não ocorre transcrição do gene-alvo na ausência duma fonte de T7 RNA polimerase e o passo de clonagem está, deste modo, efectivamente desacoplado do passo de expressão.
O hospedeiro mais comummente utilizado é o BL21, o qual tem a vantagem de ser deficiente em ambas as proteases ''lon'' e ''ompT''.
 
 
Recentemente, a Novagen introduziu dois derivados do BL21 para finalidades especiais, dos quais salientamos a série B834 que é um auxotrófico deficiente em metionina e, então, permite elevada actividade específica marcando as proteínas-alvo com 35S-metionina ou selenometionina.
Existe uma vasta variedade de vectores pET, todos derivados do pBR322 e com base num sistema comandado pelo [http://en.wikipedia.org/wiki/Promotor promotor] T7 (do [http://en.wikipedia.org/wiki/T7_phage bacteriófago T7]) para dirigir a expressão de genes-alvo.
 
Considerando que a RNA polimerase da ''E. coli'' não reconhece o promotor T7, supõe-se que não ocorre [http://en.wikipedia.org/wiki/Transcription_%28genetics%29 transcrição] do gene-alvo na ausência dumade uma fonte de T7 RNA polimerase e o passo de clonagem está, deste modo, efectivamente desacoplado do passo de [http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_expression expressão].
 
 
O hospedeiro mais comummente utilizado é o BL21, o qual tem a vantagem de ser deficiente em ambas as [http://en.wikipedia.org/wiki/Protease proteases] ''lon'' e ''ompT''.
 
Recentemente, a Novagen introduziu dois derivados do BL21 para finalidades especiais, dos quais salientamosse salientam a série [http://www.merckbiosciences.co.uk/Products/ProductDisplay.asp?catno=69042&#relatedlit B834] que é um [http://en.wikipedia.org/wiki/Auxotroph auxotrófico] deficiente em [http://pt.wikipedia.org/wiki/Metionina metionina] e, então, permite elevada actividade específica marcando as proteínas-alvo com 35S-metionina ou selenometionina.
 
Como estirpe hospedeira do Sistema pET utilizámos ''Escherichia coli'' BL21(DE3) pET-Pfu e pET-Taq.
* '''Completo''': variedade nas configurações do sistema e muitos produtos de apoio.
 
 
===Ligações Externas===
 
[http://biotech.arl.arizona.edu/education/MCB473/mcb473docs/pET_System.pdf '''pET System Tutorial''' in Novagen 2002–2003 Catalog]
 
[http://www.emdbiosciences.com/docs/NDIS/inno01-000.pdf NewslatterNewsletter]
 
[http://www.merckbiosciences.co.uk/docs/docs/PROT/TB055.pdf pET Manual]
 
http://www.emdbiosciences.com/html/NVG/pettablemenued.html pET E. coli T7 expression vectors]
 
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