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* Pretende-se que os ''primers'' tenham uma T<sub>m</sub> (''melting temperature'') de 49-51 ºC.
Utilizando o programa [http://www.unc.edu/~cail/biotool/oligo/index.html Oligonucleotide properties calulator] pode calcular a T<sub>m</sub> automaticamente.
Também pode calculá-la manualmente, aplicando as seguintes fórmulas aritméticas:
'''Nota:'''
Ambas as equações assumem que o Emparelhamento ocorre nas condições padrão de 50 nM ''primer'', 50 mM Na<sup>+</sup> e pH 7.0.
<center>
{| border| ''Primer''
| '''''Primer'''''|| ''Forward''|| ''Reverse''
|-
| '''T<sub>m</sub>''' (Basic)|| 49 ºC|| 49 ºC
|-
| '''Tamanho'''|| 25 nucleótidos|| 25 nucleótidos
|-
| '''Conteúdo GC'''|| 28%|| 28%
|}
</center>
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