Diferenças entre edições de "Engenharia genética/Desenho dos primers"

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* '''Nota''': A sequência codificante (CDS) deve começar com “atg” (codão '''atg''start'” (codão ''start'') e acabar com ”'''taa'''” (codão '''''stop''''').
 
Como pode observar, a sequência apresentada é a da cadeia complementar, de modo que o codão '''''start''''' está na base (cat ⇒ atg) e o codão '''''stop''''' está no topo (tta ⇒ taa).
 
 
* Vamos amplificar o gene GFP inteiro, incluindo os codões ''start'' e ''stop'' (mas nada fora do gene).
 
* Precisamos de dois ''primers'' para o PCR, um ''primer '''forward''''' e um ''primer '''reverse. O primer forward vai ligar a cadeia Crick e o primer reverse vai ligar a cadeia Watson'''''.
As duas cadeias do DNA, denominam-se watson e crick:
 
O ''primer '''forward''''' liga-se à cadeia Crick e o ''primer '''reverse''''' liga-se à cadeia Watson.
Watson 5’-ATG…TAA-3’
Crick 3’-TAC…ATT-5’
 
O DNA é sempre exibido na forma 5’-3’, e normalmente a cadeia Crick é invisível. Na nossa sequência, só vemos a cadeia Watson.
 
Precisamos de dois primers para o PCR, um primer forward e um primer reverse. O primer forward vai ligar a cadeia Crick e o primer reverse vai ligar a cadeia Watson.
 
Queremos uma Tm 49-51C. Um programa denominado “Oligonucleotide properties calulator” pode calcular o Tm.
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